武漢泰特沃斯科技有限公司位于中國武漢，專業(yè)從事氣相色譜儀的生產(chǎn)、色譜耗材的代理。以下由武漢泰特沃斯科技有限公司色譜技術(shù)人員主要介紹用氣相色譜儀測定血液中DHA、EPA含量。GC2030系列氣相色譜儀是武漢泰特沃斯科技有限公司最新推出的新一代國產(chǎn)氣相色譜儀，技術(shù)先進，性能可靠。

二十二碳六烯酸（DHA）、二十碳五烯酸（EPA）是人體血液中的兩種物質(zhì)，對人體的健康有著重要的影響。因此，使用科學(xué)方法對血液中DHA，EPA進行檢測是非常重要的。使用氣相色譜儀對血液中的DHA和EPA進行檢測實驗，詳細介紹了實驗材料、方法和結(jié)果，最終證實，氣相色譜儀適用于檢測血液中的DHA和EPA。

DHA，即二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對人體非常重要的不飽和脂肪酸，屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。EPA ，即二十碳五烯酸，是魚油的主要成分，屬于Ω-3系列多不飽和脂肪酸。目前測定這兩種脂肪酸的方法有很多種，而氣相色譜儀法是比較常用的一種。通過對氣相色譜儀測定血液中DHA，EPA含量進行探討，以期更準(zhǔn)確地測定血液中DHA和EPA的含量。

1 實驗材料的準(zhǔn)備

試劑：甲醇、乙酸乙酯、正己烷等，均為分析純；DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品；內(nèi)標(biāo)溶液（1 mg/mL，正二十三碳烷酸無水乙醇溶液）；鹽酸甲醇溶液（氯化鈉與濃硫酸反應(yīng)，產(chǎn)生的氯化氫氣體導(dǎo)入甲醇中，經(jīng)標(biāo)定物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L）。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇

毛細管柱：老化過后毛細管柱，型號FFAP，規(guī)格30 m（長）×0.25 mm（內(nèi)徑）×0.25μm（液膜厚度）。柱溫：初始180 ℃，保持3.0 min，然后2 ℃/min升至250 ℃；汽化室溫度260 ℃；檢測器溫度300 ℃；分流比1∶60；進樣量1.0 μL。

2.2 樣品處理

用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞試管內(nèi)，加入物質(zhì)的量濃度為4.5 mol/L的濃硫酸2滴酸化，加內(nèi)標(biāo)液10 μL，用漩渦混合器混合3 min；用乙酸乙酯漩渦混合提取2次（1 mL和0.5 mL），3 000 r/min離心3 min，合并提取液放入5 mL尖底具塞試管備用；把乙酸乙酯提取液用小流量高純氮氣吹干；加入物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封，置60 ℃恒溫水浴箱中酯化30 min后，冷卻。加入分析純的正己烷1 mL，漩渦混合1 min，靜置3 min，提取正己烷層放置在5 mL尖底具塞試管內(nèi)備用，把正己烷提取液用小流量高純氮氣吹干，加30 μL正己烷溶解。

2.3 色譜分離條件的結(jié)果

經(jīng)過試驗，在色譜條件下人血清游離脂肪酸甲酯達到完全分離，互不干擾。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

質(zhì)量濃度為1 mg/mL的脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別用正己烷將DHA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、 500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，將EPA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X（mg/mL）為橫坐標(biāo)，對照品的峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖，按內(nèi)標(biāo)法計算，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果DHA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.005X+0.004 5，R=0.998；EPA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 0.0062X－0.003 6，R=0.996。

脂肪酸的分析過程較為復(fù)雜，其中樣品的前期處理過程非常關(guān)鍵。衍生化過程中DHA、EPA的酯化效率決定了兩種物質(zhì)含量檢測的準(zhǔn)確度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—氫氧化鉀室溫酯化法、甲醇—氫氧化鈉加熱回流酯化法和薄層層析法。此次采用了鹽酸/甲醇溶液酯化法，DHA、EPA的萃取效率高，可完全分離，互不干擾，保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。且以正二十三碳烷酸無水乙醇溶液為內(nèi)標(biāo)，其保留時間與DHA，EPA相近，能夠準(zhǔn)確測定DHA，EPA含量。

這種方法精密度和重復(fù)性良好，短時間內(nèi)較穩(wěn)定，并且在加標(biāo)回收率試驗中，DHA平均回收率為92.0%～93.6%，RSD為3.0%～3.6%，EPA的平均回收率為92.3%～94.0%，RSD為2.8%～4.0%，適用于人血液中DHA，EPA的檢測。